新型PPARγ 激动剂VSP-17 的合成

0 引言

PPARγ 是一种可调节脂肪酸储存和葡萄糖代谢的配体依赖性转录因子，在多种癌细胞的增殖、凋亡和转移中有着重要作用[1-2]。PPARγ 激动剂罗格列酮及吡格列酮经过多项研究发现它们作为癌细胞的抗转移药物有着巨大的潜力，然而长期使用罗格列酮会引起一些不良反应，例如体重增加，体液潴留和患心脏病的风险增加。本团队合成一种新型的PPARγ 激动剂，有望成为抗肿瘤转移的创新性药物。

1 材料与方法

1.1 仪器。Prominence UFLC+ LCMS -2020 液相色谱质谱联用仪（日本Shimadzu 岛津有限公司）XS105DU 电子天平（瑞士METTLERTOLEDO 梅特勒托利有限公司）；GENEX 单道可调移液器（上海宝予德科学仪器有限公司）；Medium-S800UVF 实验室纯水系统（上海和泰仪器有限公司）

1.2 试剂。所有化学品和溶剂（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）均为试剂级，并在使用前通过标准方法纯化。

1.3 合成路线。合成路线如图1 所示。

图1 VSP-17 的合成路径

1.3.1 1-对三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸甲酯（3）的合成：在0℃下将NaH（60%矿物油分散体，11.0 mmol）分批加入1H-吲哚-5-羧酸甲酯（1）（1.89 g，10.0 mmol）的无水DMF（10mL）溶液中，在0℃下边加边搅拌，30 分钟后，加入1-溴甲基-4-三氟甲基苯（2）（2.88 g，12.0 mmol），在室温下搅拌24 小时后，待反应混合物冷却至室温，将其倒入100 mLH2O 中并用100 mLEtOAc 进行萃取。有机相用无水Na2SO4干燥，减压蒸发溶剂后，用EtOAc/石油醚（1:9）在硅胶柱上纯化粗产物，得到白色纯净固体1-对三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸甲酯（3）（2.94g，80%）[3]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ8.29（d，J=1.6 Hz，1H），（m，4 H），7.55（d，J=8.7 Hz，1 H），7.36（d，J=7.9 Hz，2H），（m，1 H），5.60（s，2H），3.83（s，3 1-对三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸（4）的合成：将（3）（1.67g，5.0 mmol）和5MNaOH 溶液（5mL）加入20 mLTHF 悬浮液中，在50℃下搅拌至原料耗尽，在其达到室温后，加入2MHCl，用50 mLEtOAc 稀释并用盐水洗涤。用无水Na2SO4干燥合并后的有机相。减压蒸发溶剂后，在快速色谱上纯化粗产物，得到白色固体产物（4）（1.41 g，88%）[4]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ12.47（s，1H）），8.26（s，1 H），（m，3 H），7.65（d，J=3.2 Hz，1 H），7.51（d，J=8.6 Hz，1 H），7.36（d，J=8.1 Hz，2 H），6.68（d，J=3.1 Hz，1 H），5.60（s，2H），1.39（s，2H）。

1.3.3 VSP-17 的 合 成：在0 ℃下 向 产 物（4）（1.60 g，5.0 mmol）的无水DMF（20 mL）溶液中加入2.0 当量的DMAP（1.22 g，10 mmol）和2.0 当 量 的BOP（4.42 g，10 mmol），冰浴条件下搅拌0.5 小时后，加入1.2 当量的吡啶-4-甲基甲胺5（0.65 g，6.0 mmol），搅拌反应直至所有原料耗尽，然后将混合物倒入10%HCl 水溶液中，用EtOAc萃取水相2 次，用无水Na2SO4干燥合并的有机相并真空浓缩，用快速色谱（硅胶，己烷/乙酸乙酯=2/1）纯化得到所需无色固体产物VSP-17（1.64 g，80%）[5-7]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ（m，2 H），（m，2H），7.65（d，J=8.1 Hz，2 H），（m，2 H），（m，2 H），（m，2H），6.63（t，J=6.0 Hz，1H），5.17（s，2 H），4.64（d，J=6.0 Hz，2 H）。HRMS（ESI）m/z[M+H]+的计算值为：410.1480，实测值为：410.1478[M+H]+。

1.4 TR-FRET 测试。TR-FRET 测试结果如图2 所示。

2 结果

2.1 合成。通过酰胺化和苄基化两步反应所得到的化合物产率和纯度（纯度≥98%）较高。

2.2 生物活性。如图2 所示，TR-FRET 测定结果证明GVS-12 与PPARγ 结合的动力学抑制常数（Kinet icinhibition constant，Ki） 为0.27μM， 表 明VSP-17 可 以 激 活PPARγ。

图2 利用Cos-7 细胞进行荧光素酶报告基因测试VSP-17 的PPARγ 激活作用（n=3，）

3 结论

化合物VSP-17 的合成原料简单易得，终产物产率、纯度高，TR-FRET 测定结果也证明VSP-17 可以激活PPARγ。

4 讨论

我们结合了罗格列酮以及新型PPARγ 调控剂SR1664的结构特点，并且根据它们与PPARγLBD 晶体复合物作用形式，规避产生副作用的结合位点，设计合成具有全新母核的化合物VSP-17，为后期顺利开展全面的动物活性、毒理、药代等临床前评价提供保障[8]。

[1] 陈涛,蒋博,郭丽.新型PPARγ激动剂的设计与合成[J].四川大学学报(医学版),2010,41(4)：700-702.

[2] 于然,周艳丽,环奕,等.一类新型的四氢异喹啉类PPARα/γ受体激动剂的设计、合成与活性研究[J].药学学报,2011(3)：311-316.

[3] 钟朝斌,吴逢伟,朱学军,等.PPARγ激动剂的设计、合成及其胰岛素增敏活性[J].有机化学,2004,40(s1)：136-140.

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